Izolacija i pročišćavanje halogenhidrin-dehalogenaze iz stanica genetski modificirane Escherichia coli

završni rad

• Naslov (engleski): Isolation and purification of halohydrin dehalogenase from the genetically modified Escherichia coli
• Autor: Iva Mihaljević
• Mentor: Zvjezdana Findrik Blažević (mentor)
• Član povjerenstva: Zvjezdana Findrik Blažević (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Martina Sudar (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Marija Vuković Domanovac (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Fakultet kemijskog inženjerstva i tehnologije; Zagreb
• Datum i država obrane: 2020-09-22, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: TEHNIČKE ZNANOSTI; Kemijsko inženjerstvo

Sažetak

U ovom radu provedena je izolacija i pročišćavanje enzima halogenhidrin-dehalogenaze (HheC). Najprije je uzgojena biomasa genetski modificiranih stanica Escherichia coli s visokim udjelom HheC. Nakon razbijanja bakterijskih stanica ultrazvukom, odvojeni su proteini od ostatka staničnog materijala centrifugiranjem te je dobiven sirovi enzimski ekstrakt. Kako bi se utvrdila uspješnost eksperimenta, mjerena je koncentracija proteina metodom po Bradfordu i aktivnost enzima HheC spektrofotometrijskim testom. Proces izolacije HheC je bitan za biokatalizu jer je otkriveno da ovaj enzim ima sposobnost kataliziranja reakcije otvaranja epoksida s malim “neprirodnim” anionskim nukleofilima, kao što su azid, cijanid, cijanat, tiocijanat, nitrit i formijat. Također, bitna primjena HHDH enzima je u proizvodnji optički čistih C3 ili C4 prekursora, na primjer, (R)-4-cijano-3-hidroksibutanoata za sintezu statina.

Sažetak (engleski)

In this work, isolation and purification of the enzyme halohydrin dehalogenase (HheC) were carried out. Firstly, biomass of genetically modified Escherichia coli cells with a high HheC percentage was grown. After the disruption of bacterial cells by ultrasound, the proteins were separated from the rest of the cellular material by centrifugation and the crude enzyme extract was obtained. To determine the success of the experiment, the Bradford method for protein quantification and the spectrophotometric assay for HheC enzyme activity were used. The HheC isolation process is important for biocatalysis because it has been found that this enzyme has the ability to catalyze the epoxide ring-opening reaction with small "unnatural" anionic nucleophiles such as azide, cyanide, cyanate, thiocyanate, nitrite and formate. Also, the essential application of HHDH enzymes is in the production of optically pure C3 or C4 precursors, for example, (R)-4-cyano-3-hydroxybutanoate for statin synthesis.

• Ključne riječi: halogenhidrin-dehalogenaza; enzim; epoksid; izolacija enzima; statin
• Ključne riječi (engleski): halohydrin dehalogenase; enzyme; epoxide; enzyme isolation; statin
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:149:702999
• Projekt: Šifra: IP-2018-01-4493; Naziv: Enzimska sinteza fluoriranih kiralnih građevnih blokova; Kratica: EnzyFluor; Voditelj: Maja Majerić-Elenkov; Pravna nadležnost: Hrvatska; Financijer: HRZZ; Linija financiranja: IP
• Studijski program: Naziv: Primijenjena kemija; smjerovi: Kemija u zaštiti okoliša i izvori energije, Specifični materijali i napredne tehnologije, Primijenjena organska kemija; Smjer: Kemija u zaštiti okoliša i izvori energije; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: preddiplomski; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) primijenjene kemije (univ. bacc. appl. chem.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup; Datum isteka embarga: 2022-10-01
• Datum i vrijeme pohrane: 2023-05-05 12:04:58