Praćenje stabilnosti enzima putem mjerenja raspodjele veličine proteina

završni rad

• Naslov (engleski): Monitoring of enzyme stability by measuring protein size distribution
• Autor: Barbara Arambašić
• Mentor: Zvjezdana Findrik Blažević (mentor)
• Član povjerenstva: Zvjezdana Findrik Blažević (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Marija Vuković Domanovac (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Miroslav Jerković (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Fakultet kemijskog inženjerstva i tehnologije; Zagreb
• Datum i država obrane: 2022-09-19, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: TEHNIČKE ZNANOSTI; Kemijsko inženjerstvo

Sažetak

N-acetilneuraminska kiselina (Neu5Ac) je sijalična kiselina čiju sintezu katalizira enzim N-acetilneuraminat sintaza. N-acetilmanozamin (MaNAc) kondenzacijom s fosfoenolpiruvatom (PEP) daje N-acetilneuraminsku kiselinu (Neu5Ac). Za potrebe ovog rada enzim je pripremljen i pročišćen. Prekomjerna ekspresija proteina neuB, koji kodira N-acetilneuraminat sintazu, postignuta je ubacivanjem plazmida u genetski modificirane stanice Escherichia coli. Bakterijske stanice razbijene su ultrazvukom i pročišćene centrifugiranjem. Dobiveni enzim pročišćen je u koloni s niklom i nitrilotrioctenom kiselinom i skladišten u odgovarajućem puferu na 4°C. Stabilnost enzima sintaze N-acetilneuraminske kiseline (NeuS) je praćena preko specifične aktivnosti, raspodjele veličina čestica i koncentracije proteina.

Sažetak (engleski)

N-acetylneuraminic acid (Neu5Ac) is a sialic acid whose synthesis is catalyzed by the enzyme N-acetylneuramine synthase. N-acetylmannosamine (MaNAc) by condensation with phosphoenolpyruvate (PEP) gives N-acetylneuraminic acid (Neu5Ac). For the purposes of this work the enzyme was prepared and purified. Overexpression of the protein neuB, which encodes N-acetylneuramine synthase, was achieved by inserting the plasmid into genetically modified Escherichia coli cells. Bacterial cells were disrupted by ultrasound and purified by centrifugation. The resulting enzyme was purified in a column with nickel and nitrilotriooctenoic acid and stored in the appropriate buffer at 4°C. The stability of N-acetylneuraminate synthase (NeuS) enzyme was monitored through specific activity, particle size distribution and protein concentration.

• Ključne riječi: N-acetilneuraminska kiselina; N-acetilmanozamin; fosfoenolpiruvat; N-acetilneuraminat sintaza; neuB
• Ključne riječi (engleski): N-acetylneuraminic acid; N-acetylmannosamine; phosphoenolpyruvate; N-acetylneuraminate synthase; neuB
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:149:486322
• Projekt: Šifra: 956631; Naziv: C-C Bond Formation Using Top Performing Enzymes; Kratica: CC-Top; Voditelj: Zvjezdana Findrik Blažević; Pravna nadležnost: eu; Financijer: EK; Linija financiranja: H2020
• Studijski program: Naziv: Kemijsko inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: preddiplomski; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/ prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) inženjer/inženjerka kemijskog inženjerstva (univ. bacc. ing. cheming.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup; Datum isteka embarga: 2023-09-19
• Datum i vrijeme pohrane: 2023-02-17 13:22:46