| Abstract | N-nitrozamini su organski kemijski spojevi koji se klasificiraju kao kancerogeni za ljudsko zdravlje. Pojavljuju se svuda oko nas u raznim prehrambenim i kozmetičkim proizvodima, no posljednjih godina je otkriveno kako se u značajnoj količini javljaju kao nusprodukti dezinfekcije vode za piće korištenjem procesa poput kloriranja i kloraminacije. Vrlo je važno postići njihovu jednostavnu i brzu detekciju u vodi kako bi se odredila njezina prikladnost za piće. Cilj ovog rada je razviti metodu tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti koja koristi detektor s nizom dioda za određivanje N-nitrozamina te provesti validaciju kako bi se odredila njezina prikladnost za tu namjenu. Ispitivanja su provedena na osam N-nitrozamina: N-nitrozodi-n-propilamin (NDPA), N-nitrozopirolidin (NPYR), N-nitrozodietilamin (NDEA), N-nitrozomorfolin (NMOR), N-nitrozo-di-n-butilamin (NDBA), N-nitrozopiperidin (NPIP), N-nitrozodifenilamin (NDPhA) i N-nitrozodimetilamin (NDMA). Kako bi se izabrala najprikladnija pokretna faza, najprije su provedena izokratna eluiranja s acetonitrilom, etanolom i metanolom kao B fazom, dok je u sva tri slučaja MilliQ voda činila A fazu. Dobiveni su rezultati pokazali kako je kombinacija acetonitrila i MilliQ vode najbolji izbor pokretne faze za određivanje N-nitrozamina te su upravo oni korišteni u daljnjem istraživanju. Za razvoj metode ispitivano je više gradijenata te se u konačnici kao najbolji izbor pokazao gradijent čije vrijeme analize traje 20 minuta uz protok 0,5 mL min^-1. Razvijena HPLC-DAD metoda je potom validirana pri čemu su ispitane izvedbene karakteristike metode: selektivnost, linearnost, ponovljivost, međupreciznost, istinitost, granica detekcije, granica kvantifikacije te je definirano radno područje metode. Metoda se analizom uzoraka vodovodne vode pokazala selektivnom što omogućuje njezinu primjenu za određivanje N-nitrozamina u vodi. Postignuta je dobra linearnost (R^2 ≥ 0,995) te je također zadovoljen kriterij za ponovljivost i međupreciznost (RSD ≤ 10 %) za sve N-nitrozamine. Zadovoljavajuće iskorištenje postignuto je pri višim koncentracijama, dok za niže koncentracije nije zadovoljen kriterij prihvatljivosti za sve N-nitrozamine. Rezultati su pokazali kako je razvijenom HPLC-DAD metodom moguće uspješno odrediti osam ispitivanih N-nitrozamina te provesti njihovu kvantifikaciju. Provedenom validacijom metode potvrđena je njezina primjenjivost u svrhu određivanja N-nitrozamina što omogućuje primjenu ove metode za analizu uzoraka vode. |
| Abstract (english) | N-nitrosamines are organic chemical compounds which are classified as cancerogenic for humans. They appear all around us, such as food and cosmetic products but in recent years it was discovered that they appear in significant amounts as byproducts of water disinfection, such as chlorination and chloramination. It's important to achieve their simple and fast detection in water, in order to confirm water suitability for drinking. Aim of this research is to develop a high-performance liquid chromatography method with diode array detection for the determination of N-nitrosamines and to perform method validation to determine its fitness for purpose. Research has been carried out on eight N-nitrosamines: N-nitrosodipropylamine (NDPA), N-nitrosopyrrolidine (NPYR), N-nitrosodiethylamine (NDEA), N-nitrosomorpholine (NMOR), N-nitrosodibutylamine (NDBA), N-nitrosopiperidine (NPIP), N-nitrosodiphenylamine (NDPhA) and N-nitrosodimethylamine (NDMA). To determine the best choice of the mobile phase, isocratic elution was performed with acetonitrile, ethanol, and methanol as B phase, while A phase was MilliQ water for all three cases. Obtained results have shown that combination of acetonitrile and MilliQ water was the best choice of mobile phase for N-nitrosamines determination, and they were used in further research. More than few gradients were tested and ultimately as the best choice was proved gradient whose analysis time lasts 20 minutes with flow rate of 0,5 mL min^-1. Developed HPLC-DAD method was then validated whereby the following performance characteristics were tested: selectivity, linearity, repeatability, intermediate precision, trueness, detection limit, quantification limit, and the working range. The method was proved to be selective by analyzing tap water samples, which enables its application for the determination of N-nitrosamine in water. The method achieved good linearity (R^2 ≥ 0.995) and also met the criteria for repeatability and intermediate precision (RSD ≤ 10%) for all N-nitrosamines. Satisfactory recovery was achieved at higher concentrations, while the acceptance criteria for all N-nitrosamines was not achieved at lower concentration level. Validation results confirmed applicability of the developed HPLC-DAD method for quantitative determine of all eight tested N-nitrosamines in water samples. |
